卵白质降解速率和半衰期的酌量关于了解卵白质功能、开导调度疾病特异性卵白质降解的药物以及酌量调度卵白质水平的小分子化合物具有伏击有趣有趣。卵白质品貌的调度关于督察常常的细胞功能至关伏击，细胞中的通盘卵白质皆在连接被降解和替换。

真核细胞有两种主要的卵白质降解阶梯——泛素-卵白酶体阶梯和自噬-溶酶体阶梯。其他具体的降解阶梯不错阅读往期著作：《5种卵白质降解阶梯你皆了解吗？》

泛素-卵白酶体阶梯是细胞中卵白质降解的主要阶梯，参与多样卵白质的降解。它以一种特定的、高度复杂的机制降解细胞中的卵白质，何况不错通往日泛素化酶来逆转。自噬-溶酶体阶梯是一种自我降解历程，它通过溶酶体介导降解卵白质，通过包被卵白质并造成自噬溶酶体来温情细胞的代谢需求。这两种阶梯在督察细胞常常的卵白质代谢中皆起着至关伏击的作用，卵白质的颠倒降解可能导致很多疾病，尤其是神经退行性疾病和癌症。

卵白质的半衰期变化很大，从几分钟到几天不等，卵白质降解速率的不同对卵白质功能很伏击。常用的检测卵白质踏实性的要津包括：

（1）脉冲跟踪测定；（2）质谱技巧；（3）CuAAC（铜催化叠氮化物-炔烃环加成物）符号法；（4）卵白质降解阶梯扼制剂；（5）CHX（环己酰亚胺）法。

（1）脉冲跟踪测定法是基于将辐照性核素符号的氨基酸（举例S35符号的蛋氨酸）添加到细胞培养基中，进而细胞中特定卵白质的变化历程不错通过免疫思路或其他要津检测。然则，这种要津使用同位素，对酌量东谈主员的健康和安全有一定的负面影响，操作历程复杂。

（2）连年来，质谱技巧一经发展到检测卵白质一级结构的降解。因此，通过质谱法检测卵白质降解可用于酌量卵白质结构，功能和质料结束。

（3）此外，据报谈，CuAAC（铜催化叠氮化物-炔烃环加成物）可用于符号细胞中新合成的卵白质，因而可用于酌量卵白质降解。

（4）卵白质降解酌量还不错通过添加扼制剂来酌量细胞降解阶梯。举例，卵白酶体扼制剂如MG-132、环氧霉素和硼替佐米通过阻断通过泛素-卵白酶体阶梯来扼制卵白质降解。氯喹和巴弗洛霉素A1等扼制剂通过中庸溶酶体中的酸性 pH值起作用，因为pH值是溶酶体卵白酶功能所必需的，因此氯喹和巴弗洛霉素A1大略扼制溶酶体阶梯介导的卵白质降解。

（5）酌量卵白质踏实性的最常用要津是卵白质翻译闭幕剂环己酰亚胺（CHX）。

CHX简介：CHX是灰链霉菌的家具，可用于详情分子生物学中卵白质或酶的半衰期。CHX是一种翻译扼制剂，不错阻断真核核糖体易位历程。值得驻防的是，CHX不错扼制真核卵白合成但不可扼制原核卵白质合成。CHX的优点是易于操作，不需要探讨正在进行的卵白质合成的影响，何况不错进行高通量筛选。另一方面它的主要流毒是 i） 在莫得特异性的情况下阻断通盘卵白质翻译，以及 ii） 具有高细胞毒性，遥远不停后可引起大边界细胞死字，故不适用于降解速率较慢的卵白质。因此，需要笔据合适的条款汲取CHX。

CHX使用要津：浅陋来说等于用合乎浓度的CHX不停细胞（经常为100μg/mL），不停不同时代点网罗细胞进行WB实验检测跟着不停时期的延伸，卵白质水平的变化。

效用分析：半衰期短的卵白质会跟着时期的推移飞速降解，而半衰期长的卵白质跟着时期的推移，降解的很少。因此，CHX不错在不使用辐照性同位素的情况下灵验地可视化卵白质降解的速率。

案例分析：鄙人面这个案例中，用50μg/mL的CHX不停6h和12h，WB检测卵白抒发，发现敲低AHI1加快了Tyk2的卵白质降解。需要驻防的是，内参卵白Tublin比拟踏实，是以即便CHX不停12h，Tublin也莫得理会的降解。

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敲低AHI1加快了Tyk2的卵白质降解（Ying Miao et al. 2023. bio protocol）

需要驻防的是，卵白质的降解速率互相之间相反很大。因此，在进行细腻的实验之前，需要先摸索一下成见卵白质降解的速率。一般提议建造少至5个时期点来检测卵白质的半衰期，以确保不错不雅察到理会的卵白质降解的变化趋势。

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